該試劑盒使用雙抗體夾心法測定樣本中的人鈣粘蛋白1(PCDH1)水平。用純化的人鈣粘蛋白1(PCDH1)抗體包被微孔板制備固相抗體。依次將原鈣粘蛋白1(PCDH1)加入單克隆抗體包被的微孔板中,然后與HRP標(biāo)記的原鈣粘素1(PCDH1)抗體結(jié)合形成抗體-抗原-酶標(biāo)記的抗體復(fù)合物。*清洗后,添加基質(zhì)TMB以顯色。
TMB在HRPase的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化為黃色。樣品中的顏色深度與PCDH1呈正相關(guān)。使用微孔板閱讀器測量450nm波長處的吸光度(OD值),并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中PCDH1的含量。
人鈣黏素ELISA試劑盒的使用注意事項:
1、試劑盒應(yīng)在取出冷藏環(huán)境并在室溫下平衡15-30分鐘后使用。如果酶標(biāo)簽的涂層板在啟封后沒有用完,則應(yīng)將該條儲存在密封袋中。
2、濃縮洗滌液可能結(jié)晶,稀釋時可在水浴中加熱溶解,洗滌時不影響結(jié)果。
3、樣品添加的每個步驟都應(yīng)使用取樣器,并應(yīng)經(jīng)常檢查其精度,以避免試驗誤差。每次采樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)。如果樣本數(shù)量較大,建議使用噴槍進(jìn)行采樣。
4、請在每次測量的同時制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好制作多個孔。如果樣品中待測物質(zhì)的含量過高,請在測量前用樣品稀釋劑稀釋一定次數(shù)(n次),然后在計算時乘以總稀釋比(×n×5)。
5、密封膜只能使用一次,以避免交叉污染。
6、使基板遠(yuǎn)離光線。
7、嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作,測試結(jié)果必須根據(jù)微板閱讀器讀數(shù)確定。
8、所有樣品、洗滌液和各種廢物應(yīng)作為傳染性物質(zhì)處理。